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做ELISA實驗,事先收集好的標本需如何處理?
更新時間:2023-12-04瀏覽:1312次

  做ELISA實驗,事先收集好的標本需如何處理?


  做ELISA實驗,在處理樣本應該先了解收集樣本的注意事項。

  【標本收集注意事項】

  1.收集血液的試管應為一次性的無熱原,無內毒素試管。

  2.血清和血漿避免使用溶血,高血脂標本。

  3.標本應清澈透明,懸浮物應離心去除。

  4.標本收集后若不及時檢測,需按一次使用量分裝,凍存于-20℃,-80℃電冰箱內,避免反復凍融。

  5.可根據(jù)標本的實際情況,做適當倍數(shù)稀釋(建議做預實驗,以確定稀釋倍數(shù)) 。

  6.收集標本,盡量做到雙份的用量,避免一次實驗失敗,重復實驗時標本缺失,從而耽誤實驗進程。

  


  7.收集標本時,應該做好防護措施(比如戴手套,口罩,護目鏡等),認為所有標本都具有一定的潛在危險性。

  8.樣本處理應該在生物安全柜里面,并且正確使用生物安全柜。

  樣本正確的處理方法應該是這樣的:

  【標本處理辦法】

  1.血清:將采集的全血靜置冰箱4℃過夜,然后1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。

  2.血漿:用EDTA,枸櫞酸鈉,肝素等作為抗凝劑,加入血液混勻后,1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。

  3.組織勻漿:切取組織塊,0.01MPBS中過洗一次;按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例,在冰水中勻漿。勻漿完成后,5000-10000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。

  4.細胞培養(yǎng)上清:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。

  5.尿液,腹水,腦脊液等:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃3-6個月)保存。

  注:樣品稀釋的一般原則

  用戶須查閱相關文獻了解標本內待測因子的含量,決定適當?shù)南♂尡稊?shù),以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的檢測范圍。樣品的稀釋應有詳細記錄。

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